优化大白鼠脑组织提取步骤

大白鼠取脑组织步骤是生物医学研究中常见的一项技术，尤其在药理学、生理学及神经科学等领域。为了帮助大家更好地理解这一过程，我们将详细介绍大白鼠取脑组织步骤的各个方面，从准备工作到实际操作，再到后续处理，都一一说明。

一、准备工作

在进行大白鼠取脑组织步骤之前，需要准备一些必要的工具和材料。这些包括：

实验动物：乙醚迷晕或注射乌拉坦晕倒的大白鼠一只。

工具：大剪刀、小剪刀、弯镊子、弯钳、钩镊、大号和小号药勺、滤纸、培养皿、托盘、烧杯等。

固定剂：冰冷的NMDG人工脑脊液（或其他合适的固定剂）。

其他材料：95%氧气和5%二氧化碳气的混合气、低温平台（由玻璃平皿、碎冰块和泡沫构成）、剃须刀片、切片槽、琼脂块、切片机、胶头滴管等。

二、初步处理

1. 麻醉与固定：首先，使用乙醚将大白鼠迷晕或注射乌拉坦使其晕倒，然后将其固定好，以便于后续操作。

2. 皮肤去除：用剪刀将大白鼠头部的皮肤和肌肉去除，暴露出颅骨。

三、开颅与取脑

接下来是关键的开颅和取脑步骤，这个步骤需要非常小心和精细的操作。

方法一：断头取脑法

1. 断头：用剪刀迅速剪断大白鼠的颈部，使头部和身体分离。

2. 去颅骨：剪开头皮后，用无齿镊向两边拨开颅骨片，暴露出脑组织。

3. 取出大脑：用小号药勺沿颅底部割断颅神经，小心地将大脑完整取出，迅速放入冰冷的NMDG人工脑脊液中（此步骤最好在1分钟内完成，以保持脑组织的活性）。

方法二：精细开颅法

1. 颈部剪开：将大白鼠趴着竖向放置，用大剪刀将颈部毛皮横向剪开，露出头骨底端，然后在头骨下方一点点处剪开颈部，再将头部剪下。

2. 暴露头骨：沿着两耳两眼中间竖向剪开毛皮，将毛皮拨至两边，暴露出整个头盖骨。此时可以剔除一些头骨下方颈部的肉。

3. 开颅：用大剪刀在头骨中线处划线，深划两次后，再控制力度来回划，直到头骨划破（注意力度，避免伤及脑组织）。然后用大剪刀（或小剪刀）将头骨从中间向两边撬开，适当将中下方骨头向两侧压。

4. 去除脑膜：用镊子和剪刀小心剪破脑表面的膜，直至脑表面无拉伸状。

5. 开脑顶端：用镊子在脑上部两侧（竖着）以及上方（平着）来回划动，用小剪刀剪断上方扇形骨头的两端，并用剪刀撬开。

6. 剥离脑组织：用镊子沿着脑左、右以及上端开始剥离连接点（上端有两个，中心位置有两个细的雪白连接点，中下方有两个粗的雪白连接点），至此，脑组织可以自然而然地剥离出来。

方法三：枕骨大孔法

1. 固定颅骨：用钩镊在眼眶处固定大白鼠的颅骨。

2. 剪开颅骨：用组织剪在颅骨和颈椎连接处剪断，然后将组织剪头部伸入枕骨大孔，尽量贴着骨头，朝向同侧眼眶方向剪，直到剪到眼眶。

3. 掀开颅骨：左手持钩镊插入眼眶固定颅骨，右手用弯钳夹住枕骨大孔处的骨头，直接掀开，完整的脑组织就会显现出来。

4. 取出脑组织：从小脑处将脑组织向上推起，用小剪刀剪断脑神经，小心取出脑组织。

四、后续处理

取出脑组织后，还需要进行一系列后续处理，以保证脑组织可以用于进一步的研究和分析。

修块

1. 放置脑组织：将脑组织腹侧朝下放置在自制的低温平台上（玻璃平皿中加入碎冰块，倒扣在泡沫上，以平皿底面作为操作平面）。

2. 浸润滤纸：在玻璃皿底放置一张滤纸，用胶头滴管吸取少量冰冻的人工脑脊液将其完全浸润。

3. 切除多余部分：用不锈钢剃须刀片沿冠状面切除约二分之一的前脑部分和全部小脑，只留下中脑部分。

切片